聯系我們

54333592

15921694156

021-54500868

產品
  • 產品
  • 文章
搜索
首頁 >> 技術資料 >>最新推薦 >> 染料法和探針法RT-qPCR的優缺點比較
详细内容

染料法和探針法RT-qPCR的優缺點比較

1.webp.jpg


一、熒光染料法(SYBR Green)


其原理是:在PCR反應體系中加入過量熒光染料,DNA擴增的過程中,熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈,發射熒光信號,隨著反應的進行,熒光強度逐漸增強,并且可以實時測量。如果你要擴增你的目標樣品40個循環,在最后一個循環結束時檢測到的熒光會比在第10個循環測得的熒光強很多。


優點:

1、成本較低,適合大規模的實驗。

2、在實驗設計階段非常省時,因為它只需要合適的引物設計。


缺點:

1、特異性不是很高。染料可以插入任何雙鏈DNA,包括引物二聚物和非特異性產物。

2、如果引物二聚體存在或者產物受到污染,得到的結果會不可靠。3、更容易與低豐度的目標產生非特異性熒光。

需要更多的時間進行結果分析。


二、寡核苷酸探針(Taqman)


這種方法涉及使用熒光標記的寡核苷酸(短DNA分子),探針通常在5 '端和3 '端都被標記。

在探針的5’端有報告基團,3’端設計淬滅基團,當報告基團接近淬滅基團時,不會檢測到熒光信號。RT-qPCR反應時,寡核苷酸兩個基團分離,即可檢測到熒光信號,并與PCR產物同步。


使用這種方法的熒光檢測依賴于兩個過程:1)引物與目標序列的結合(2)探針與引物下游

互補序列的結合。


優點:

1、更有可能只放大所需的產物,由于引物和探針的結合具有特異性。

2、不需要解離曲線,只有探針與正確的目的序列結合時才能檢測到熒光。

3、由于具有特異性,數據更可靠。

4、數據分析時節省時間。


缺點:

1、需要大規模實驗時耗費成本高。

2、需要更長的時間來設計實驗,因為需要好的引物和探針。


總的來說,這兩種熒光檢測方法都很有效,但對于你的具體實驗,可以選擇適合的方法。


最新评论
請先登錄才能進行回復登錄

幫助中心

產品列表

關于我們

客戶服務熱線

地址:上海市浦東新區繁榮路395號
產品熱線:15921694156(微信同號

郵箱:54333592@qq.com

021-54500868

Copyright 2020  上海炎熙生物科技有限公司  All rights reserved

技术支持: 能量網絡 | 管理登录
兽兽门伦理qvod电影