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【包邮】探針法支原體污染實時定量PCR試劑盒

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探針法支原體污染實時定量PCR試劑盒

Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Mycoplasma Contamination


貨號規格
Myco-qt-2020次反應
Myco-qt-5050次反應
Myco-qt-100100次反應

 

儲存:-20度,避光保存,有效期一年。避免反復凍融。


商品說明

支原體(Mycoplasma)是一種直徑約為0.1-0.3 μm、無細胞壁的原核生物,屬于柔膜菌綱(Mollicutes),常被用作柔膜菌綱的統稱。支原體具有變形能力,可透過常見過濾膜(0.22-0.45 μm),因此常規的無菌過濾方法不能將其去除,靶向細胞壁的抗生素也對其無效。由于在光學顯微鏡下無法判斷,細胞培養中的支原體污染是一個令人煩惱的問題。支原體種類繁多,目前已知的污染細胞的支原體有20多種,一般是由試劑和人工操作帶入,95%的污染事件是由常見的五種支原體引起;由原代細胞的原始組織帶入而形成的污染也有發生,污染的支原體種類分布較為廣泛。根據細胞類型、來源和培養方法的不同,文獻報道的細胞污染率在15-80%之間,極大影響了下游實驗的進行,因此必須使用專門的方法檢測這些污染。

傳統的培養法操作比較繁瑣,需要很長時間(最長需要28天),受操作人員的實驗技能影響比較大,并且有些支原體種類不能體外培養。而PCR法可有效克服上述缺點。本試劑盒采用探針法對細胞污染進行PCR檢測,使用通用性探針和引物,可識別超過150種支原體。常見的污染類型,如:豬鼻支原體(Mycoplasma hyorhinis)、唾液支原體(Mycoplasma salivarium)、口腔支原體(Mycoplasma orale)、精氨酸支原體(Mycoplasma arginini)、萊氏無膽甾原體(Acholeplasma laidlawii)、發酵支原體(Mycoplasma fermentans)和肺炎支原體(Mycoplasma pneumoniae),均可以檢出。根據易感程度和與人類的密切程度,選取12種支原體進行驗證,靈敏度最高可達到每反應2個基因組,大部分種類靈敏度分布在每反應2-12個基因組,最低的是解脲脲原體,靈敏度為每反應86個基因組。本試劑盒適用于檢測歐洲藥典要求的所有支原體種類,大部分種類可以達到歐洲藥典要求的10 CFU/ml的靈敏度,考慮到支原體培養條件和菌株活性的差異,少數種類的支原體難以判斷是否符合這個要求。

試劑盒包含熱啟動DNA聚合酶、dNTP(以dUTP代替dTTP)、引物、探針、陽性對照品。探針在5`-端以FAM修飾,3`-端以MGB修飾。引物具有柔膜菌/支原體特異性,與真核生物無交叉反應,即使與親緣關系較近的革蘭氏陽性菌,如:丙酮丁醇梭菌(Clostridium acetobutylicum)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)和肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae),也無交叉反應。DNA聚合酶源自極端嗜熱菌(Thermus thermophilus),經改造后較普通的Taq酶具有更強的抗抑制能力和熱穩定性。通過結合特異性單克隆抗體,在室溫下DNA聚合酶活性被抑制。在PCR循環的熱變性階段,抗體受熱被去除,此時DNA聚合酶活性恢復,因此獲得“熱啟動”功能。熱啟動可減少殘余DNA的污染,提高PCR擴增效率、靈敏度和目的片段產量。


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 染料法支原體污染實時定量PCR試劑盒,貨號:Myco-qs-20,Myco-qs-50,Myco-qs-100;產品鏈接:http://www.sjf8.com/products/20675268.html

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