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CCK-8試劑盒

Cell Counting Kit -8


貨號規格價格
CT-K-11ml,100次140元
CT-K-55ml,500次480元
CT-K-1010ml,1000次920元



保存條件:4℃避光保存一年有效, -20℃避光保存兩年有效。 避免反復凍融。


產品文檔:CCK-8試劑盒說明書.pdf



商品說明

檢測原理

Cell Counting Kit-8(CCK-8試劑盒),是一種基于WST-8的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。

WST-8屬于MTT的升級產品,能在電子載體1-甲氧基PMS的作用下被還原成水溶性甲臜產物,生成的甲臜量與活細胞數量成正比,因此顏色的深淺與細胞的增殖成正比,與細胞毒性成反比。使用酶標儀在450mM波長處測定OD值,可以反映活細胞數量。


CCK-8法與普通的MTT法相比,具有顯著特點:

★靈敏度高,數據可靠,重現性好

★操作簡便,省時省力

★水溶性,不需要換液,尤其適合于懸浮細胞

★無需放射性同位素和有機溶劑,對細胞毒性低

★為1瓶溶液,毋需預制,即開即用

★適合于高通量藥物篩選

CCK-8用途:藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗


CCK-8方法的優勢

CCK-8法與其他細胞增殖/毒性檢測方法的優勢比較

檢測方法

MTT

XTT

WST-1

CCK-8

甲臜產物的水溶性

差(需加有機溶劑溶解后再檢測)

產品性狀

粉末

2瓶溶液

溶液

1瓶溶液

使用方法

配成溶液后使用

現配現用

即開即用

即開即用

檢測靈敏度

很高

很高

檢測時間

較長

較短

較短

最短

檢測波長

560-600nm

420-480nm

420-480nm

430-490nm

細胞毒性

高,細胞形態完全消失

很低,細胞形態不變

很低,細胞形態不變

很低,細胞形態不變

試劑穩定性

一般

較差

一般

很好

批量樣品檢測

可以

非常適合

非常適合

非常適合

便捷程度

一般

便捷

便捷

非常便捷

CCK-8試劑盒操作說明

CCK-8溶液可直接加入到細胞中,不需要與其它組分預混。由于CCK-8溶液非常穩定并且細胞毒性很小,所以可以進行長時間孵育,例如孵育24-48小時。

在進行以下實驗之前,可先設置空白對照孔,僅加入相應量細胞培養液、藥物和CCK-8溶液,不加入細胞。

方法一. 制作標準曲線(測定細胞具體數量)

1、先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量,然后接種細胞到培養板內。

2、按比例(例如:1/2比例)依次用培養基等比稀釋成一個細胞濃度梯度,一般要做3-5個細胞濃度梯度,每個濃度建議3-6個復孔。

3、接種后培養2-4小時使細胞貼壁,然后按培養基體積的10%加入CCK-8試劑,培養一定時間后測定OD值,制作出一條以細胞數量為橫坐標(X軸),OD值為縱坐標(Y軸)的標準曲線。根據此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數量(使用此標準曲線的前提是實驗的條件要一致,便于確定細胞的接種數量以及加入CCK-8后的培養時間。)

方法二. 細胞活性檢測

1、在96孔板中接種細胞懸液(100μL/孔)。將培養板放在培養箱中預培養一段時間(37℃,5% CO2)。

2、向每孔加入10 μL CCK-8溶液。

3、將培養板在培養箱內孵育1-4小時。

4、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。

方法三. 細胞增殖-毒性檢測

1、在96孔板中加入90μL的細胞懸液。將培養板放在培養箱預培養24小時(37℃,5% CO2)。

2、向培養板加入10μL不同濃度的待測物質。

3、將培養板在培養箱中孵育適當的時間(例如:6、12、24或48小時)。

4、向每孔加入10μL CCK-8溶液。

5、將培養板在培養箱內孵育1-4小時。

6、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。


活力計算:

細胞活力(%)=[A(加藥)-A(空白)]/[A(不加藥)-A(空白)] ×100

A(加藥):具有細胞、CCK 溶液和藥物溶液的孔的吸光度

A(空白):具有培養基和CCK 溶液而沒有細胞的孔的吸光度

A(0 加藥):具有細胞、CCK 溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度

細胞活力:細胞增殖活力或細胞毒性活力


注意事項:

1,由于使用96孔板進行檢測,如果細胞培養時間較長,一定要注意蒸發問題。一方面,由于96孔板周圍一圈最容易蒸發,可以采取棄用周圍一圈的辦法,改加相同量的PBS、 水或培養液;另一方面,可以把96孔板置于靠近培養箱內水源的地方,以緩解蒸發。

2,本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化的反應, 所以還原劑(例如一些抗氧化劑)會干擾檢測。如果待測物質有氧化性或還原性的話,可在加CCK-8之前更換新鮮培養基(除去培養基,并用培養基洗滌細胞兩次,然后加入新的培養基),去掉藥物影響。當然藥物影響比較小的情況下,可以不更換培養基,直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。培養基中酚紅和血清的吸光度,在計算時通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不會對檢測造成影響。

3,有條件的情況下建議采用多通道移液器,可以減少平行孔間的差異。加入CCK-8試劑時,建議斜貼著培養板壁加,不要插到培養基頁面下加,容易產生氣泡,會干擾OD值讀數。加完之后最好能夠離心,以免CCK-8液滴懸掛在壁上。用酶標儀檢測前需確保每個孔內沒有氣泡,否則會干擾測定。

4,若暫時不測定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。24小時內測定,吸光度不會發生變化。

5,建議先做幾個孔摸索接種細胞的數量和加入CCK-8試劑后的培養時間。白細胞可能需要培養較長時間。若使用24孔板或6孔板實驗,請先計算每孔相應的接種量,并按照每孔培養基總體積的10%加入CCK-8溶液。

6,若沒有450nm的濾光片,可使用吸光度在430-490 nm之間的濾光片,但是450nm濾光片的檢測靈敏度最高。

7,金屬對CCK-8顯色有影響。當終濃度為1 Mm的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會抑制5%、15%、90%的顯色反應,使靈敏度降級。如果終濃度是10 Mm的話,將會100%抑制。

8,本產品僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品。為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。


相關產品:

MTT噻唑藍,貨號:CT-MTT-1,產品鏈接:http://www.sjf8.com/products/18259143.html



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