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MTT噻唑藍

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CT-MTT-11.0克粉末
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商品說明

MTT全稱為3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,漢語化學名為 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽,商品名:噻唑藍,是一種黃顏色的染料。在水中的溶解度為20 mM。

CAS No

分子量

分子式

純度

298-93-1

414.32

C18H16N5SBr

>98%

MTT實驗的原理:

活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能將MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲臢(Formazan),并沉積在細胞中,而死細胞不能進行這個反應。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細胞中的甲臢,用酶標儀在570nm波長處(490nm -570nm之間都可以)測定其光吸收值,在一定細胞數范圍內,MTT結晶形成的量與細胞數成正比。根據測得的吸光度值(OD值)來判斷活細胞數量,OD值越大,細胞活性越強(如果是測藥物毒性,則表示藥物毒性越。。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經濟。


MTT實驗方法(供參考)

一、MTT的配制

通常配制的MTT濃度為5mg/ml?梢苑Q取MTT 0.5克,溶于100 ml的磷酸鹽緩沖液(PBS)或無酚紅的培養基中,用0.22μm濾膜過濾以除去溶液里的細菌,放4℃ 避光保存,兩周內用完。也可分裝后避光保存在-20℃長期保存,并避免反復凍融。在配制和保存的過程中,容器最好用鋁箔紙包住。

二、實驗步驟

A、貼壁細胞

1、收集對數期細胞,調整細胞懸液濃度,向96孔板每孔加入100ul鋪板,調節待測細胞密度使每孔含1000-10000個細胞,邊緣孔用無菌水或PBS填充。

2、在5%CO2,37℃條件下孵育。原則上,細胞貼壁后即可加藥,或兩小時,或半天時間,或過夜。一般常在前一天下午鋪板,次日上午加藥。一般設5-7個藥物梯度,每孔100ul,一般設3個復孔即可,復孔越多結果越準確。同時設置調零孔(僅含培養基和藥物溶解介質)和對照孔(僅含細胞和藥物溶解介質)。

3、置于5%CO2,37℃條件下,孵育時間根據藥物的作用特點來決定,一般24-72小時,中途可在倒置顯微鏡下觀察細胞狀況。

4、每孔加入20ul MTT溶液(5 mg/ml,即0.5% MTT),37℃繼續培養3-4小時。若藥物能夠與MTT反應,可先離心后棄去培養液,小心用PBS洗2-3遍后,再加入含MTT的培養液。

5、終止培養,小心吸去孔內培養液。

6、每孔加入150 ul二甲基亞砜,置搖床上低速振蕩10分鐘,使結晶物充分溶解。在570nm(可用630nm校準)測量各孔的吸光值。

B、懸浮細胞

1、收集對數期細胞,調節細胞懸液濃度1E6/ml,依次將①細胞懸液50ul(即5E4cell/孔),②待檢測藥物50ul,共100ul加入到96孔板(邊緣孔用無菌水或PBS填充)。一般設5-7個藥物梯度,一般設3個復孔即可,復孔越多結果越準確。同時設置調零孔(僅含培養基和藥物溶解介質)和對照孔(僅含細胞和藥物溶解介質)。

2、置于5%CO2,37℃條件下,孵育時間根據藥物的作用特點來決定,一般24-72小時,中途可在倒置顯微鏡下觀察細胞狀況。

3、每孔加入10 ul MTT溶液(5 mg/ml,即0.5%MTT),37℃繼續培養3-4 h。

4、離心(1000轉x10min),小心吸掉上清,每孔加入150 ul二甲基亞砜,置搖床上低速振蕩10 min,使結晶物充分溶解。在570nm(可用630nm校準)測量各孔的吸光值。


注意事項

1、MTT法只能用來檢測細胞相對數和相對活力,但不能測定細胞絕對數。在用酶標儀檢測結果的時候,為保證實驗結果的準確,MTT 吸光值要控制在儀器的線性讀取范圍內。

2、MTT最好現用現配,配制成5mg/ml無菌過濾后,在4℃避光保存兩周內有效,或在-20℃長期保存,避免反復凍融,最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光,以免分解。

3、保存的MTT溶液需要無菌,MTT對菌很敏感;往96孔板加時不避光也沒有關系,畢竟時間較短,不放心的話可以把操作臺上的照明燈關掉。

4、配制MTT時用PBS溶解,也有人用生理鹽水配,可用60℃水浴助溶。

5、MTT的缺點:由于MTT經還原所產生的甲臢產物不溶于水,需被溶解后才能檢測。這不僅使工作量增加,也會對實驗結果的準確性產生影響,而且溶解甲臢的有機溶劑對實驗者也有損害。

6、MTT有致癌性,用的時候小心,為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作,最好戴透明的薄膜PE手套。

7、本產品僅限于專業人員的科學研究使用。


相關產品:CCK-8試劑盒,貨號:CT-K-1,CT-K-5,CT-K-10,產品鏈接:http://www.sjf8.com/products/18259367.html


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